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在室温中对ecl超敏发光液进行实验操作要注意些什么
发布时间:2019-04-28   点击次数:65次
   在室温中对ecl超敏发光液进行实验操作要注意些什么
  ecl超敏发光液的操作步骤
  方法/步骤1:
  常规电泳、转膜、HRP标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。以下操作在室温进行。
  方法/步骤2:
  新鲜配制发光工作液。将BufferA和BufferB按1:1比率混合,制成发光工作液(每25px2膜需要0.125ml发光工作液)。转移到清洁的塑料小盒中。
  方法/步骤3:
  用镊子将漂洗过的膜取出,将膜的下缘与滤纸轻轻接触以除去膜上多余的洗液,但勿使膜完全干燥。将膜转移至有发光工作液的塑料小盒中,使其完全浸泡,轻轻摇晃,室温孵育几十秒到1分钟。
  方法/步骤4:
  用镊子将膜夹起5-10秒,并将膜的下缘与滤纸轻轻接触以除去膜上多余的发光液,迅速将膜完全包裹于洁净保鲜膜内,去除气泡和褶皱,蛋白面朝上固定于X片暗盒内。
  方法/步骤5:
  在黑暗中一次重叠放入3张X光胶片,30分钟或更长时间后全部取出显影。
  方法/步骤6:
  对同一张膜进行多次蛋白杂交:用PBST或TBST洗涤掉发光液(10min×3次),然后从开始一抗杂交即可。
  注意事项
  优化一抗和二抗的比例
  选择高质量的膜
  ecl超敏发光液的注意事项
  1.为获得*实验结果,请务必优化实验条件,包括检测样品的用量、一抗、二抗稀释度、杂交膜及封闭试剂的选择,并且发光液请现用现配。
  2.建议在封闭缓冲液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温-20(终浓度为0.05%),以减少非特异性结合。
  3.由于叠氮钠是HRP抑制剂,在缓冲液中应避免使用叠氮钠作为防腐剂。
  4.免疫印迹实验进行全过程中,请确保印迹膜始终处于湿润状态,避免干燥。
  5.在与膜发生接触过程中请佩戴手套或者使用洁净镊子,避免蛋白污染。
  6.实验过程中,请使用洁净器材。保证非金属设备没有明显划痕,金属设备表面无锈。锈可能导致膜上带有污点或者高背景。
  以上便是今天关于在室温中对ecl超敏发光液进行实验操作要注意些什么的全部分享了,希翼对大家今后使用本设备能有帮助。
 
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