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核酸染料的推荐使用方法和注意指南
发布时间:2019-05-05   点击次数:64次
   核酸染料的推荐使用方法和注意指南
  核酸染料的使用方法:
  注意:染料使用前应在室温下彻底融化混匀后使用。
  核酸染料后染方法(推荐方法)
  1.制作不含染料的凝胶,按照常规方法进行电泳。
  2.用pH7.0-8.5的缓冲液(如:TAE,TBE或TE),按照10000:1的比例稀释核酸染料浓缩液(如50ml1×TAE中加入5μl染料),混匀,制成染色溶液。
  3.将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上,让工作液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
  4.紫外灯下观测。
  核酸染料预染方法
  1.制胶:按常规方法制备凝胶,凝胶温度降至60℃左右时加入10000×SYBR,使染料终浓度为1×,如40ml凝胶溶液中加入4μl染料。
  2.上样、电泳后紫外灯下观察。
  核酸染料的使用注意事项
  1.胶厚度不宜超过0.5cm,胶太厚会影响检测的灵敏度。
  2.加核酸染料的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响,但不明显。
  3.通过凝胶电泳回收DNA片段时,建议使用核酸染料染色,在自然光下切割DNA条带,避免紫外线与EB对
  目的DNA产生的损伤,可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。
  4.虽然未发现核酸染料有致癌作用,但是各种核酸染料的致癌作用学术界一直存在争议,同时核酸染料对皮肤、眼睛会有一定的刺激,为安全起见,大家强烈建议操作时依然应该每次带手套,不小心接触
  皮肤后应该立即清洗,并妥善处理废弃物。
  以上便是今天关于核酸染料的推荐使用方法和注意指南的全部分享了,希翼对大家今后使用本设备能有帮助。
 
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